ОЧИСТКА ВНЕКЛЕТОЧНЫХ ПРОТЕИНАЗ ИЗ Bacillus subtilis СКВ 256 БИОСПЕЦИФИЧЕСКОЙ ХРОМАТОГРАФИЕЙ

摘要

Разработан простой и эффективный метод очистки внеклеточных протеиназ из Bacillus subtilis B-l (СКВ 256) до высокоочищенного состояния. Для этого синтезирован сорбент, представляющий собой сорсилен, пропитанный гемоглобином или цитохромом с. Выявлена существенная разница при использовании в качестве биоспецифического лиганда гемоглобина и цитохрома с. Выход фермента составил около 40.6 и 65.6% от адсорбированного на носителях фермента, соответственно. Показано, что протеиназы из этой культуры представлены двумя формами, которые различаются молекулярными массами, т.к. разделяются при гель-фильтрации на сефадексе G-50, но эти формы в денатурированном состоянии в 12.5%-ном ПААГе в присутствии 0.1% ДДС-Na проявляются в виде одной полосы с ММ 27 кДа. Изучено влияние рН среды, ионной силы и этанола на сорбцию и десорбцию протеиназ на биоспецифическом сорбенте. Показано положительное влияние 20%-ного этанола на процесс десорбции протеиназ.