ОПТИМИЗАЦИЯ МЕТОДА ОПРЕДЕЛЕНИЯ БИОМАРКЕРА ИПРИТА В ПЛАЗМЕ ЧЕЛОВЕЧЕСКОЙ КРОВИ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ ЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТО-МАСС-СПЕКТРОМЕТРИИ ВЫСОКОГО РАЗРЕШЕНИЯ

摘要

С использованием ВЭЖХ с тандемным масс-спектрометрическим детектированием высокого разрешения оптимизирован метод определения в плазме крови биомаркера иприта (S-гидроксиэтил-тиоэтилового аддукта с альбумином), основанный на его гидролизе ферментом протеиназой К с образованием устойчивого трипептида с цистеином, пролином и фенилаланином: S-[HETE]-Cys-Pro-Phe. Оптимизированы условия пробоподготовки образцов человеческой плазмы, искусственно зараженных ипритом (выбор объема аликвоты, типа фермента для гидролиза), масс-спектрометри-ческого детектирования (выбор оптимальных пар ионных реакций, режимов детектирования с высоким разрешением), а также программы градиентного элюирования при разделении анализируемой смеси методом ВЭЖХ. Предел обнаружения иприта в плазме крови человека составил 1 нг/мл. Предложенный подход опробован при анализе образцов плазмы человеческой крови методом введено—найдено, а также в рамках Первого официального биомедицинского теста, проведенного в 2016 г. международной Организацией по запрещению химического оружия (ОЗХО), и показал хорошую точность, воспроизводимостьи специфичность определения.