МЕТОД ПОЛУЧЕНИЯ АДЪЮВАНТНО АКТИВНЫХ ПЕПТИДОВ -МИМЕТИКОВ GMDP С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ МОНОКЛОНАЛЬНЫХ АНТИТЕЛ И КОМБИНАТОРНЫХ БИБЛИОТЕК ПЕПТИДОВВ ФОРМАТЕ ФАГОВОГО ДИСПЛЕЯ

摘要

Описан метод получения пептидов -- миметиков GMDP, потенциально обладающих адъювантной активностью, но без отрицательных эффектов, присущих GMDP. Для поиска пептидов, обладающих адъювантной активностью GMDP, были использованы высокоспецифичные моноклональные антитела против GMDPи пептидные комбинаторные библиотеки в формате фагового дисплея. При иммуноаффинном обогащении библиотек для получения высокоаффинных испецифичных пептидов применяли различные методы элюции. При элюции фаговых частиц с иммуносорбента 1 мкМ раствором природного лиганда -- GMDP, был получен единственный пептид структуры Arg-Val-Pro-Pro-Arg-Tyr-HIs-Ala-Lys-Iie-Ser-Pro-Met-Val-Asn (RN). При использовании для элюции буфера с низким значением рН (0.1 М глицин-HCl, рН 2.2) были выделены два пептида: Ser-Gly-Arg-Val-Ala-Val-Ser-Pro-Asp-Ser-Pro-Leu-Phe-Tyr-Pro (SP) и Arg-Tyr-Gly-Gly-Ser-Val-Leu-Asn-Ile-Glu-Cys-Gln-Phe-Tyr-Gly (RG). Константы аффинности для пептидов RN и SP составляли 3.6 X 10~8 M и 3.5 X 10~8 M~(-1) соответственно. Специфичность взаимодействия с моноклональными антителами проверяли с помощью конкурентного вытеснения пептидов из комплекса антиген--антитело с помощью GMDP. Пептид RN обладал адъювантной активностью, сходной с адъювантной активностью GMDP, но не проявлял пирогенного эффекта, присущего GMDP. Метод может быть использован для поиска миметиков биологически активных низкомолекулярных соединений.