ТОЧЕЧНЫЕ АМИНОКИСЛОТНЫЕ ЗАМЕНЫ В Са~(2+)-СВЯЗЫВАЮЩИХ ЦЕНТРАХ РЕКОВЕРИНА. III. МУТАНТ С ЧЕТВЕРТЫМ РЕКОНСТРУИРОВАННЫМ Са~(2+)-СВЯЗЫВАЮЩИМ ЦЕНТ

摘要

В отличие от рековерина дикого типа, в котором из четырех потенциальных Са~(2+)-связывающнх центров работают только два (2-й и 3-й), мутант +EF4содержит еще один активный Са~(2+)-связывакшщй центр, реконструированный из 4-го потенциального Са~(2+)-связывающего домена путем введения в него аминокислотных замен с помощью сайт-направленного мутагенеза. Методами собственной флуоресценции и кругового дихроизма иссдедовановлияние замен в 4-м потенциальном Са~(2+)-связы-вающем центре миристоилированного рековерина на структурные характеристики и конформаци-онную стабильность этого белка. Показано, что свободная от ионов Са~(2+) форма (апо-форма) полученного мутанта обладает более высокой кальциевой емкостью, существенно меньшей термоста-бильностью и заметно отличными вторичной и третичной структурами по сравнению с апо-формой рековерина дикого типа.