Schnelle Identifizierung von GFP-Fusionsproteinen-Aufreinigung transfizierbarer Plasmid-DNA im 96er Format und Einsatz in transienter Zelltransfektion

摘要

Unter Verwendung einer hyperaktiven Tn5-Transposase wird die GFP-kodierende Sequenz nach dem Zufallsprinzip in eine beliebige, fur ein Protein kodierende Targetsequenz inseriert. GFP (green fluorescent protein) kann so in einer einzigen in vitro Transpositionsreaktion an praktisch jeder moglichen Stelle des Targetproteins inserieren. Uber ein effizientes Screeningverfahren werden die Insertionen in korrekter Orientierung und im richtigen Leseraster fur die produktion von Fusionsproteinen identifiziert.