УГЛЕВОД-СВЯЗЫВАЮЩИЙ МОДУЛЬ 28 СЕМЕЙСТВА ТЕРМОСТАБИЛЬНОЙ ЭНДО-1,4-beta-ГЛЮКАНАЗЫ СеЮ ИЗ АНАЭРОБНОГО МИКРООРГАНИЗМА Caldicellulosiruptor bescii НЕОБХОДИМДЛЯ МАКСИМАЛЬНОЙ АКТИВНОСТИ ФЕРМЕНТА И НЕОБРАТИМО СВЯЗЫВАЕТСЯ С АМОРФНОЙ ЦЕЛЛЮЛОЗОЙ

摘要

Определена нуклеотидная последовательность фрагмента хромосомы термофильной анаэробной бактерии Caldicellulosiruptor bescii (syn. Anaerocellum thermophilum), который содержит четыре открытые рамки считывания. Вторая рамка кодирует мультимодульную эндоглюканазу CelD (749 а.о., 85019 Да). N-концевая часть этого белка содержит сигнальный пептид и каталитический модуль 5-го семейства гликозидгидролаз (GH5), далее расположены субстрат-связывающиймодуль семейства 28 (СВМ28) и три SLH-модуля. Рекомбинантная эндоглюканаза и два ее отдельных модуля — каталитический и модуль СВМ28 — полученыв E. coli и очищены до гомогенности. По своим каталитическим свойствам Cell) является эндо-1,4-beta-глюканазой (КФ 3.2.1.4), максимальная активность которой проявляется на растворимом р-глюкане ячменя при рН 6.2 и температуре 70°С. Фермент стабилен при 50°С в течение 30 дней. При удалении модуляСВМ28 активность GH5 на целлюлозных субстратах уменьшается, так же как и его термостабильность. Модуль СВМ28 практически необратимо связывается с аморфной целлюлозой в дапазоне рН от 4 до 11, при температурах от 0 до 75°С и при концентрации соли от 0 до 5М NaCl. Его удается снять с целлюлозы только 100%-ным формами лом или 1%-ным раствором SDS.