КЛОНИРОВАНИЕ ГЕНОВ, ВЫДЕЛЕНИЕ И ИССЛЕДОВАНИЕ СВОЙСТВ РЕКОМБИНАНТНЫХ ДНК-ЛИГАЗ ТЕРМОФИЛЬНЫХ АРХЕЕВ Pyrococcus abyssi И Methanobacterium thermoautotrophicum

摘要

Гены ДНК-л и газ термостабильных археев Pyrococcus abyssi (1йадНК-лигазы) и Methanobacterium thermoautotrophicum (М/ЙДНК-лигазы) клонированы в клетках Escherichia coli. Исследована активность очищенных ферментов в реакции лигирования смеси двух олигонуклеотидов, один из которых содержит пре-формированную шпилечную структуру. Максимальный выход продуктов реакции под действием обеих ДНК-лигаз наблюдали вблизи 70°С; при стехиометрическом отношении фермента к субстрату выход продукта достигает плато на уровне 70—75%. Исследованные ДНК-лигазы различаются по термостабильности. Время полуинактивации /МДНК-лшазы при 90°С составляет около 60 мин. MthНК-лигаза при этой температуре полностью инактивируется в течение 10 мин. Рекомбинантные ДНК-лигазы P. abyssi и М. thermoautotrophicum стабильны и могут длительно хранится при 4°С.