РЕЗУЛЬТАТЫ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОГО ЗАРАЖЕНИЯ ЯГНЯТ ВИРУСОМ БОЛЕЗНИ ШМАЛЛЕНБЕРГ И РАЗРАБОТКА ТЕСТ-СИСТЕМЫ НА ОСНОВЕ ПЦР В РЕАЛЬНОМ ВРЕМЕНИ ДЛЯ ВЫЯВЛЕНИЯ ВИРУСНОЙ РНК

摘要

Болезнь Шмалленберг (БШ) - новая вирусная инфекция жвачных животных, характеризующаяся лихорадкой, диареей, абортами, рождением нежизнеспособного потомства с пороками развития, включающими деформацию суставов, сколиоз, гидроцефалию и искривление шеи. Возбудитель - РНК-содержащий вирус (ВБШ), относящийся к семейству Bunyaviridae, роду Orthobunyavirus, серогруппе Simbu. Цель настоящей работы - моделирование БШ в экспериментальных условиях с использованием штамма вируса, выделенного в Западной Европе, разработка ПЦР-РВ для выявления РНК возбудителя БШ и изучение локализации агента в разных органах зараженных ягнят. В работе использовали ВБШ штамм "MU-2013" любезно предоставленный профессором Мадридского Университета J.M. Sanchez-Vizcaino (Испания). Для выявления антител к возбудителю БШ в сыворотке крови животных применяли ИФА-набор - "Ingezim Schmallenberg"(Ingenasa, Испания). Разработан тест на основе ПЦР в реальном времени для выявления РНК вируса болезни Шмалленберг в сыворотке крови и органахзараженных животных. В качестве внутреннего контроля использовали плазмиду содержащую ген зеленого флуоресцентного белка, и разработанные нами праймеры и зонд, для его амплификации. В качестве референтных - праймеры и зонд, разработанные в Германии и рекомендованные МЭБ. Моделирование болезни Шмалленберг в экспериментальных условиях у ягнят показало короткий период виремии (2-4 суток), практически полное отсутствие клинических признаков и циркуляцию вируса в лимфатической системе, особенно в селезенке, подчелюстных и предчелюстных лимфатических узлах.