Невирусная доставка гена apoA1 человека в клетки млекопитающих in vitro И in vivo

摘要

Исследованы подходы к генной терапии, атеросклероза путем невирусного переноса гена аполипоп-ротеина A1 (apoA1) - основного белкового компонента антиатерогенных липопротеинов - в клетки печени. Сконструирован плазмидный вектор для экспрессии полноразмерного гена apoA1 человека в клетках млекопитающих. Конструкция содержит последовательности, бактериальной плазмиды, позволяющие ей реплицироваться в клетках Escherihia coli, и кассету для экспрессии гена apoA1, фланкированную инвертированными терминальными повторами аденоассоциирован-ного вируса человека. Для доставки векторной ДНК использован синтетический полимер полиэти-ленимин (ПЭИ, 25 кДа). Показано, что в результате ПЭИ-опосредованной трапсфекции клеток в культуре ашгтгичным вектором, содержащим репортерный ген зеленого флуоресцирующего белка, 50-70 % клеток экспрессируют введенный ген. На экспериментальных животных, которым вводили конструкцию с гемм apoA1 человека прямой инъекцией в печень, продемонстрировано, что белок apoA1 человека тестируется в плазме крови в течение 15 сут после доставки гена. ПЦР-анализ суммарной ДНК печени подопытных животных показал наличие расчетного фрагмента гена apoA1 человека у крыс через 15 дней после введения гена.