Использование механизма РНК-интерференции для ингибирования экспрессии гена АЦК-оксидазы томата с целью увеличения лежкости плодов

摘要

Для получения трансгенных растений томата с пролонгированным сроком хране-ния плодов нами были сконструированы бинарные векторы, запускающие меха-низм РНК-интерференции. В качестве мишени был выбран ген АЦК-оксидазы тома-та, ключевого фермента биосинтеза этилена. Для создания генетических конструк-ций использовали полную последовательность четвертого экзона гена LeACOl раз-мером 496 п. н. Для изучения влияния ориентации повторов на эффективность РНК-интерференции нами спроектировано два возможных варианта экспрсссион-ных кассет. В результате агробактериальной трансформации томата гибридной ли-нии Ялф получено 28 трансгенных линий с обратной-прямой ориентацией фрагмен-тов по отношению к промотору и 19 линий с противоположной ориентацией. Мето-дом ПЦР подтверждена интеграция вставки селективного гена устойчивости к кана-мицину во всех линиях, а целевой последовательности - в 27 и 18 линиях, соответс-твенно. В результате анализа лежкости собранных плодов обнаружено значитель-ное замедление созревания для большинства проанализированных линий, несущих инвертированные фрагменты в обратной-прямой ориентации. Плоды этих линий после сбора на бланжевой стадии не портились при хранении в течение 3-4 мес. Процесс созревания плодов линий с прямой-обратной ориентацией повторов ДНК не отличался от такового для контрольных растений. Нами проведен также анализ динамики изменения окраски плодов при хранении в контролируемых условиях в течение 140 дней.