Compara??o de 3 protocolos para aumento da resolu??o de bandas em cariótipo constitucional e uso de FISH (Pintura Cromoss?mica) para elucida??o de anormalidades citogenéticas

摘要

Resolu??o ?550 bandas é sugerida por programas de controle de qualidade em citogenética para estudo cariotípico de dismorfismos e deficiência intelectual. Entre os protocolos disponíveis est?o o uso de agentes que inibem a condensa??o cromoss?mica por intercala??o das bases de DNA, como actinomicinaD e brometo de etídio. A técnica de FISH pode ser utilizada para elucida??o de anormalidades cariotípicas. Os objetivos deste trabalho foram: (a) padroniza??o de protocolos para aumento do nível de resolu??o de bandas em cariótipo constitucional de sangue periférico e (b) avalia??o por meio da técnica de FISH de altera??es cromoss?micas de origem desconhecida. Foram realizados cariótipos de 54 amostras, 11 com 10?L de actinomicinaD (1mg/mL), 26 com 2,5?L de brometo de etídio (10mg/mL) e 17 com 5,0?L de brometo de etídio (10mg/mL) e comparadas com culturas padr?o (meio de cultura RPMI suplementado com 10% de soro fetal bovino e 1% de fitohemaglutinina incubadas a 37°C por 72h) quanto ao índice mitótico, qualidade das metáfases, nível de resolu??o de bandas e detec??o de anormalidades. Após padroniza??o foram estudados 5 casos com sondas de pintura cromoss?mica total [whole chromosome painting (wcp)] para os 24 cromossomos (Chromoprobe Multiprobe? OctochromeTM System, Cytocell, UK), envolvendo anormalidades citogenéticas n?o conclusivas (5q, 9p, 14q e pequenos cromossomos marcadores). A técnica de array-CGH CytoGenomics (Agilent, USA) foi aplicada em um caso (5q). Em rela??o ao índice mitótico, qualidade das metáfases e detec??o de anormalidades [4 casos: +21, +21, XXY, fra(16)], n?o houve diferen?a entre os protocolos. As culturas com brometo de etídio 5,0?L apresentaram maior percentual de metáfases com ?550 bandas (53%) (p<0,05), [culturas padr?o: 7%, actinomicinaD: 18% e brometo de etídio 2,5?L: 15%]. FISH identificou a origem dos materiais adicionais presentes nos cromossomos 5q, 9p e 14q, porém foi inconclusiva nos demais casos. A técnica de array-CGH foi elucidativa no caso selecionado. Prepara??es com 5?L de brometo de etídio resultaram em melhor resolu??o de bandas, mas comparada ao protocolo padr?o n?o mostrou diferen?a nos achados citogenéticos. A técnica de FISH se mostrou ineficaz na análise de cromossomos marcadores muito pequenos. Técnicas citogen?micas, como array-CGH, poder?o ser utilizadas como primeiro exame para identificar ganhos e perdas de material gen?mico, com utiliza??o subsequente de cariótipo para estudo de risco de recorrência e aconselhamento genético.