摘要:本研究通过使用AdEasy重组腺病毒系统,成功构建了含有鹅细小病毒VP3基因的穿梭转移载体pshuttle-VP3,并通过菌内同源重组技术,与骨架载体在BJ5183感受态菌中进行同源重组,简化了重组腺病毒载体的构建过程,提高了重组的成功率。重组腺病毒还可进行多途径免疫,如滴鼻点眼、气雾免疫等。本实验利用AdEasy腺病毒系统(该系统用的载体是缺失E11E3区的复制缺陷型病毒载体),构建了包含GPVVP3基因的重组腺病毒载体质粒,并用脂质体法转染到含有腺病毒E1基因的293细胞中,对重组腺病毒进行包装。当病毒传至第10代时,提取病毒DNA,测序结果表明插入基因未发生突变,显示该重组腺病毒具有一定的遗传稳定性。IFA实验检测,通过对荧光的观察,证实该重组腺病毒感染293细胞后成功的表达了VP3蛋白。