摘要:肉桂醇脱氢酶(Cinnamyl Alcohol Dehydrogenase,CAD)是控制木质素生物合成途径中的最后一步关键酶,对植物的木质素合成调控有十分重要的意义.本文根据已克隆的华南象草PpCAD基因cDNA序列,构建原核表达载体pGEX-PpCAD,转化BL21后诱导融合蛋白GEX-PpCAD表达,并进行诱导体系筛选,以期为PpCAD的体外酶活研究奠定基础.结果表明:在浓度为0.02mmol/L的IPTG下,28℃诱导1h就能产生少量的可溶性融合蛋白,大小为69kDa,除去GST大小,PpCAD约40kDa,与预期结果相符.随着诱导时间的延长,形成包涵体.当IPTG浓度为0.1mmol/L时,以相同条件诱导5min就能产生包涵体融合蛋白.低温和乙醇处理可以减缓蛋白表达速率,但不能减少包涵体蛋白的产生.细菌的冻融处理可以增加包涵体蛋白的提取纯度与丰度.