摘要:本研究室分离到一株能够以非相关性碳源(如葡萄糖,果糖等)发酵合成中长链聚羟基脂肪酸酯(Medium-chain-lengthP0lyhydroxyalkanoate,PHA<,MCL>)的细菌。经BIOLOG微生物分类鉴定系统和16S rRNA序列同源性分析鉴定,最终命名该菌为门多萨假单胞菌NK-01 (Pseudomonas mendocina NK-01)。该菌株在氮源限制的情况下,利用葡萄糖合成的PHA<,MCL>经核磁共振(NMR)、傅立叶红外(FT-IR)、气-质联用(GAS-MASS)等分析手段,确立了其结构由3-羟基己酸,3-羟基辛酸,3-羟基癸酸,△<'7>-3-羟基十六烷酸,3-羟基十八烷酸五种单体构成。PHA<,MCL>常温下具有很好的粘弹性,Mw为196,676,Tm为54.10℃。PHA<,MCL>占细胞干重50%。由phaCl基因编码的PHA合酶是PHA合成的关键酶。我们获得了PHA合成酶基因phaCl,利用大肠杆菌表达载体pBluescript SK-构建重组载体pBSphaCl,重组的E.coli JM109在PHA生产培养基中发酵并加入丙烯酸抑制大肠杆菌β氧化通路。以所构建的工程菌株进行了发酵合成。产物经鉴定确立为3-羟基辛酸(3HO)和3-羟基己酸(3HHx)共聚酯。