新生大鼠神经干细胞的体外培养与冷冻复苏

摘要

目的：分离培养新生SD大鼠神经干细胞(NSCs)，观察应用不同浓度的二甲基亚砜(DMSO)作为冷冻保护剂冷冻保存不同时间的神经干细胞复苏后，其活力及生物学特性的鉴定。方法：在含细胞因子表皮生长因子及碱性成纤维细胞生长因子的无血清培养液中培养新生大鼠海马神经干细胞。经传代扩增后，培养于含有0、5%、10%、15%、20%不同浓度的二甲基亚砜和胎牛血清的神经干细胞冻存液中，在–80℃冰箱中分别冻存1周、2周及一个月后，复苏培养并鉴定，然后对其复苏率进行检测。结果：新生大鼠海马神经干细胞经冷冻复苏后，大多数细胞生长良好并形成新的克隆球。台盼蓝染色检测冻存1周、2周及一个月后的复苏率，含有10%二甲基亚砜的复苏率最高且具有显著性差异(P < 0.05)，不同冻存时间的复苏率分别为54.00 ± 1.73，59.00 ± 1.16，58.00 ± 2.08。结论：神经干细胞能在体外适宜的条件下进行培养及冻存、复苏，并且复苏后不影响其原有的生物学特性。