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An integrated miRNA functional screening and target validation method for organ morphogenesis

机译:器官形态发生的综合miRNA功能筛选和靶标验证方法

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摘要

The relative ease of identifying microRNAs and their increasing recognition as important regulators of organogenesis motivate the development of methods to efficiently assess microRNA function during organ morphogenesis. In this context, embryonic organ explants provide a reliable and reproducible system that recapitulates some of the important early morphogenetic processes during organ development. Here we present a method to target microRNA function in explanted mouse embryonic organs. Our method combines the use of peptide-based nanoparticles to transfect specific microRNA inhibitors or activators into embryonic organ explants, with a microRNA pulldown assay that allows direct identification of microRNA targets. This method provides effective assessment of microRNA function during organ morphogenesis, allows prioritization of multiple microRNAs in parallel for subsequent genetic approaches, and can be applied to a variety of embryonic organs.
机译:鉴定microRNA的相对容易性以及它们作为器官发生的重要调节剂的日益广泛的知名度推动了在器官形态发生过程中有效评估microRNA功能的方法的发展。在这种情况下,胚胎器官外植体提供了可靠且可重现的系统,可概括器官发育过程中一些重要的早期形态发生过程。在这里,我们提出了一种方法,以在移植的小鼠胚胎器官中靶向microRNA功能。我们的方法结合了使用基于肽的纳米颗粒将特定的microRNA抑制剂或活化剂转染到胚胎器官外植体中的能力,并通过microRNA下拉测定法直接鉴定microRNA靶标。这种方法可以有效评估器官形态发生过程中的microRNA功能,可以并行确定多个microRNA的优先级,以用于后续的遗传方法,并且可以应用于多种胚胎器官。

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