大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞的体外培养及内毒素攻击模型的建立

摘要

目的 探讨大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞(ATⅡ)体外培养的方法及建立脂多糖(LPS)攻击ATⅡ的模型模拟内毒素性肺损伤.方法 分离、纯化、鉴定得到大鼠AT Ⅱ,分别用0.1、1、10 μg/ml的LPS刺激AT Ⅱ,并利用细胞增殖/毒性检测试剂在刺激2、4、6h后分别检测AT Ⅱ的抑制率,从而探索内毒素性肺损伤细胞模型中最适的LPS浓度和刺激时间.结果 用碱性磷酸酶染色及电镜观察进行细胞纯度判断,未用差异贴壁去除成纤维细胞和IgG免疫黏附去除巨噬细胞纯化前,纯度达(70.4±4.8)%,纯化后可提高至(90.2±3.4)%;而用LPS干预ATⅡ,ATⅡ出现明显的细胞抑制.其中刺激浓度为1 μg/ml时,与其他3个实验组相比,细胞毒性反应最大(P＜0.01),且在各个浓度的不同刺激时间里,4h时,细胞毒性反应最大(P＜0.01).结论 细胞分离后采用差异贴壁法和免疫黏附法进行纯化可使细胞纯度提高18%左右,细胞培养时接种密度达到1×107/ml以上有利于细胞的贴壁和生长,而用1 μg/ml LPS刺激体外培养的大鼠AT Ⅱ 4h能建立较为合理的内毒素性肺损伤细胞模型.