实时荧光定量PCR检测阴道加德纳菌的方法与应用

摘要

目的:建立检测阴道加德纳菌的实时荧光定量PCR方法,用于细菌性阴道病的诊断.方法:按照Amsel诊断标准诊断细菌性阴道病;定性PCR检测患者阴道分泌物中的阴道加德纳菌;实时荧光定量PCR测定患者阴道分泌物中的阴道加德纳菌的DNA含量,同时测定标本中总的细菌16Sr RNA的DNA含量进行校正,即用阴道加德纳菌的DNA含量/16Sr RNA的DNA含量比值来表示阴道加德纳菌的相对含量.用受试者工作曲线(ROC)评价对细菌性阴道病的诊断价值.结果:定性PCR的特异度为31.9%,敏感度为93.2%.实时荧光定量PCR检测阴道加德纳菌含量的线性范围1×10～1×105拷贝数/ml.阴道加德纳菌在细菌性阴道病中的相对含量为0.561 340 0,明显高于霉菌性阴道炎(P<0.01)、其他阴道炎(P<0.01)及健康体检者(P<0.01),但与滴虫性阴道炎无明显差异(P>0.05).ROC曲线分析结果显示,曲线下面积(AUC-ROC)为0.909,当阴道加德纳菌的DNA含量/16Sr RNA的DNA含量的截断值为0.102 603 5时,其诊断细菌性阴道病的总体敏感度和特异度分别为92.9%和80.3%.结论:实时荧光定量PCR检测阴道加德纳菌的方法敏感度和特异度较高,准确性和重复性良好.对细菌性阴道病的诊断有一定的临床应用价值.