脑卒中血清培养骨髓间质干细胞移植对大鼠脑缺血再灌注的影响

摘要

目的观察脑卒中血清预处理的骨髓间质干细胞(mesenchymal stem cell,MSCs)移植对大鼠脑缺血再灌注的影响。方法分离培养骨髓MSCs并观察细胞形态,流式细胞术检测CD44、CD90、CD34、CD45抗原表达以鉴定细胞。分离缺血性脑卒中和正常大鼠血清,与MSCs共培养,制备SS-MSCs(脑卒中血清),NS-MSCs(正常脑组织血清)及FBS-MSCs(胎中血清)。Zea Longa线栓法制作MCAO大鼠模型,MSCs经尾静脉注射移植,分为MCAO组(等体积PBS)、MCAO+FBS-MSCs组(2×10^(6) cells FBS-MSCs)、MCAO+NS-MSCs组(2×10^(6) cells NS-MSCs)、MCAO+SS-MSCs组(2×10^(6) cells SS-MSCs),并设sham组(等体积PBS)。监测大鼠MSCs移植后第1、7、14天行为变化。TTC、HE、Tunel染色观察脑组织梗死情况、组织状态及细胞凋亡情况。ELISA检测脑组织中脑源性神经营养因子(BDNF)、神经生长因子(NGF)、肝细胞生长因子(HGF)、血管内皮细胞生长因子(VEGF)表达水平。同时行免疫组织化学染色观察BrdU、BDNF、NGF表达。结果成功分离高纯度MSCs,分组预处理移植后,与MCAO组比较,各干预组第7、14天双侧贴纸去除时间、mNSS评分均降低,MCAO+SS-MSCs组行为改善最显著(P<0.01)。TTC、HE、Tunel染色结果显示与MCAO组比较,MSCs移植干预均可降低大鼠脑梗死面积,改善脑组织损伤,抑制细胞凋亡,且MCAO+SS-MSCs组改善程度最大(P<0.05)。此外,MCAO+SS-MSC组BDNF、NGF、HGF、VEGF水平较MCAO组升高(P<0.01),且高于其他干预组(P<0.05)。免疫组化结果显示MCAO+SS-MSC组Brdu、BDNF、NGF表达水平较MCAO组升高(P<0.05),且高于其他干预组(P<0.05)。结论脑卒中血清预处理骨髓MSCs移植可有效改善MCAO大鼠脑组织损伤,可通过抑制脑组织细胞凋亡,上调BDNF、NGF、HGF、VEGF水平,发挥保护作用。