甘草多糖对脐血源单核细胞分化为树突状细胞过程中NF-kBp65表达的影响

摘要

目的 观察脐血源单核细胞分化为树突状细胞(DC)的过程中,核转录因子-kB p65(NF-kB p65)的表达以及GPS对单核细胞分化为DC的影响.方法 无菌条件下采集脐血,非连续密度梯度离心获取脐血单核细胞;用含粒单细胞刺激因子(GM-CSF)、白介素-4(IL-4)、脂多糖(LPS)和GPS的RPMI-1640培养液分别对细胞因子组、GPS组、联合培养组的单核细胞进行体外培养;应用倒置相差显微镜、瑞氏染色和CD86、CD83、HLA-DR、S-100的免疫细胞化学法鉴定单核细胞和DC.动态观察单核细胞分化为DC过程中不同时间点的NF-kB p65的表达,并进行图像和SPSS软件分析.结果 CD86、CD83、HLA-DR、S-100的免疫细胞化学法证实所获单核细胞和DC符合各自的形态和表型特征.在含GM-CSF和IL-4的RPMI-1640培养液培养7d时,单核细胞分化成未成熟DC(imDC);在含GM-CSF、IL-4和LPS的RPMI-1640培养液继续培养5d时,im-DC分化为成熟DC(mDC),两者的细胞核内NF-kB p65表达具有显著性差异(P＜0.05).单纯用只合GPS的RPMI-1640培养液培养单核细胞至7d时,可见其细胞核呈NF-kBp65阳性,已分化为imDC,继续培养5d,则分化为DC.用含GM-CSF、IL-4和甘草多糖的RPMI-1640培养液联合培养7d时,则该单核细胞分化为imDC;加入LPS后继续培养5d,imDC的细胞核呈NF-kBp65强阳性,免疫细胞化学法证实imDC已经分化为DC.联合培养组细胞的表型表达均强于细胞因子组和GPS组(P＜0.05).结论 脐血来源单核细胞分化为imDC和mDC过程中,细胞核内NF-kB p65表达逐渐增强.单纯用GPS(400μg/mL)可以刺激单核细胞分化为imDC和mDC,效果逊于细胞因子GM-CSF、IL-4和LPS共同培养.