胰酶消化法纯化诱导不同年龄段SD大鼠骨髓破骨细胞的体外培养

摘要

目的 用胰酶消化法纯化获取大量高纯度破骨细胞,为进行相关分子生物学研究奠定基础.方法 以1,25-(OH)2D3/地塞米松诱导培养不同年龄段(1、12、24、36d)SD大鼠的骨髓破骨细胞,采用0.25%胰蛋白酶/0.02%乙二胺四乙酸纯化.通过倒置相差显微镜观察细胞形态,采用抗酒石酸酸性磷酸酶(Trap)染色和扫描电镜观察鉴定破骨细胞,并计数分析.结果 1、12、24、36 d组大鼠骨髓破骨细胞均培养成功,经Trap染色和扫描电镜观察证实为体外有噬骨能力的破骨细胞,纯化率达到90%.1 d和12d组破骨细胞出现较早且数量较多,细胞计数两组间无统计学差异((P＞0.05),但它们与其余各组均有统计学差异(P＜0.05).结论 采用胰酶消化法纯化1,25-(OH)2D3/地塞米松诱导培养的大鼠骨髓破骨细胞,纯度较高;选用大鼠以10-12 d龄较为适宜.