PIN1反义基因转染抑制人骨肉瘤细胞的增殖

摘要

目的:观察以pIRES2-EGFP质粒为载体的PIN1反义基因转染对人骨肉瘤细胞增殖的抑制作用.方法:不同量(0、20、50、100、200、250μL)的PIN1反义基因以pIRES2-EGFP质粒为载体包装后转染人骨肉瘤MG-63细胞,收集转染前后的培养细胞和上清液,MTT法观测转染前后细胞生长曲线;流式细胞仪观测细胞生长周期变化和细胞凋亡情况;Western blot法检测PIN1蛋白的表达变化;逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测PIN1 mRNA表达变化.结果:MTT法和流式细胞仪检测显示反义PIN1基因转染后,MG-63细胞生长受到抑制,且其凋亡被促进;Western blot结果表明转染反义PIN1基因的量越多,其PIN1蛋白表达量越低,测得空白对照组及不同量转染组的光密度比值分别为0.854±0.136、0.866±0.138、0.732±0.154、0.611±0.121、0.547±0.109、0.398±0.113、0.320±0.151,差异有显著性(P＜0.05);RT-PCR检测其光密度比值分别为0.983±0.125、0.988±0.127、0.915±0.157、0.786±0.125、0.608±0.124、0.433±0.130、0.410±0.158,差异有显著性(P＜0.05).结论:反义PIN1基因可封闭PIN1 mRNA,使MG-63细胞表达的PIN1蛋白减少,从而抑制人骨肉瘤MG-63细胞增殖.