基因片段扫描检测T细胞受体多样性运用于益艾康胶囊治疗艾滋病的效果观察

摘要

目的:利用基因片段扫描建立检测T细胞受体(T cell receptor,TCR)β 链多样性的方法,并探讨运用其观察益艾康胶囊治疗艾滋病疗效的效果.方法:①收集17例健康者外周血液样本,提取基因组DNA,设计多重荧光引物,采用聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)分别扩增TCRβ 链互补决定区3(CDR3)的2个V-J重组区和1个D-J重组区,以分子量内标(Liz-500)为标准品,利用毛细管电泳技术使用一代测序仪进行基因片段扫描,最后通过GeneMapper ID-X数据分析软件,根据荧光信号差异识别PCR产物,并对数据进行自动分析.②从样本储存库中筛选40例HIV/AIDS患者在益艾康胶囊治疗前及治疗1年时的血液样本,采用上述方法检测TCRβ 链CDR3重组区多样性,从峰形、目标区域曲线下面积、离散度等方面评估其变化情况.结果:①Liz-500可在分子量50～500 bp之间扫描出15条标记片段,用以判定目标片段长度.样本DNA完整,可检测出300 bp以上扩增峰.②健康对照组TCRβ 链A/B/C管(其中A/B管为V-J区,C管为D-J区)峰形均呈现类似钟形的正态分布;③TCRβ 链C管益艾康胶囊治疗前、后曲线下面积差异有统计学意义(P<0.05),即益艾康胶囊治疗后HIV/AIDS患者TCRβ 链D-J区基因重组多样性较治疗前有所增加;④治疗前、后TCRβ 链各管离散度均大于健康对照组(P<0.05).结论:采用基因片段扫描检测T淋巴受体多样性,可以从不同角度分析益艾康胶囊对艾滋病的治疗效果,进而反映机体免疫系统状态.