罗非鱼无乳链球菌弱毒株与其母源株部分生物学特性及免疫原性比较研究

摘要

为获得一株安全、稳定无乳链球菌(Streptococua agalactiae)弱毒菌株.将前期筛选出来具有良好免疫原性疫苗候选菌株HN016通过体外连续传代获得弱毒株YM001,并对YM001生物学特征、毒力和稳定性进行鉴定,通过动物免疫实验探索了YM001免疫原性.结果显示,HN016 24h菌落直径可达1mm,形态规则,乳白色,链短,β-溶血;YM001在血平板上24h菌落直径为针尖大小,灰白色,长链状,γ-溶血.生化和特异PCR鉴定HN016和YM001均为无乳链球菌,两者只在亮氨酸芳胺酶(LeuA)和D-核糖(dRIB)存在差别.HN016和YM001血清型均为Ia型;多位点序列分型(multilocus sequence typing,MLST)均为ST-7;脉冲场凝胶电泳(Pulsed Field Gel Electrophoreais,PFGE)图谱差异显著;高剂量YM001通过注射(1.0×109CFU/fish)和口服灌胃(1.0×1010CFU/fish)感染罗非鱼均不能造成发病和死亡.YM001连续盲传11代,无罗非鱼发病死亡.罗非鱼通过注射、浸泡和口服接种YM001(1.0×108CFU/fish),第15天分别获得98.42％,66.67％和71.41％相对免疫保护率(RPS),第30天RPS分别为95.77％,61.34％和52.36％.研究表明,YM001是一株安全、稳定并且免疫原性很好的无乳链球菌弱毒菌株,可作为弱毒疫苗进行开发.