两种巨噬细胞系中PKC亚型表达的差别与其抗瘤活性的比较:依赖一氧化氮的杀瘤机制(英文)

摘要

目的 探讨LPS诱导的巨噬细胞杀瘤效应以及与PKC相关的分子机制。方法 两种巨噬细胞系P388D1和RAW264．7用LPS刺激、或先用PMA长期处理下调PKC表达、或用L-NAME阻断iNOS后再以LPS刺激，检测其杀伤肿瘤细胞系P815(MTT法)及分泌IL-1，TNF-α(ELISA法)和NO(Griess试剂)的作用；并用Western blot法检测PMA长期作用后两株细胞系中PKC亚型的表达。结果 LPS刺激的RAW264．7细胞有杀伤靶细胞的功能，而P388D1几乎没有杀伤作用。PMA预处理(1μg／mL，24 h)后可明显抑制LPS诱导的杀瘤作用。因上述结果提示PKC在巨噬细胞杀瘤活性中可能的重要作用，比较了PMA处理后两株细胞PKC亚型的表达：Western blot结果显示，在所检测的PKCα，β1，β2，δ及ε5种亚型中，在P388D1细胞均有表达，而在RAW264．7细胞仅有PKCα，PKCβ1，PKCδ表达；1μg/mL PMA作用24h后明显下调了RAW264．7细胞PKCα，PKCβ1和PKCδ的表达，在P388D1则有PKCα、PKCδ和PKCε下调，而PKCβ1和PKCβ2不被下调。结合LPS诱导的与PKC活化有关的IL-1、TNF-α及NO的产生，发现在P388D1细胞几乎不产生NO，而在RAW264．7细胞，NO合成酶抑制剂L-NAME不仅能阻断LPS诱导的NO的产生，而且明显抑制LPS诱导的杀瘤活性。结论