HIF-1α基因慢病毒载体的构建及其转染骨髓间充质干细胞后的表达

摘要

目的 构建携带缺氧诱导因子-1α(Hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)的慢病毒载体pLVX-HIF-1α-IRES-ZsGreen1,并转染骨髓间充质干细胞(Bone marrow derived stem cells,BMSCs),检测该慢病毒载体在BMSCs的表达.方法 从Puc-57-HIF-1α载体中扩增出HIF-1α基因片段,将HIF-1α基因片段与载体连接,获得慢病毒载体pLVX-HIF-1α-IRES-ZsGreen1,将其与慢病毒包装系统共同转染到293T细胞内进行病毒包装,通过观察报告基因绿色荧光蛋白的表达来测定病毒滴度.将pLVX-HIF-1α-IRES-ZsGreen1转染到BMSCs细胞内,通过Real-Time PCR和CCK-8法分别检测HIF-1αmRNA表达及BMSCs增殖能力.结果 PCR及测序结果显示慢病毒载体pLVX-HIF-1α-IRES-ZsGreen1构建正确,病毒滴度为3×108 TU/mL.pLVX-HIF-1α-IRES-ZsGreen1转染BMSCs后,BMSCs中HIF-1αmRNA表达水平及BMSCs细胞增殖能力明显高于非转染组(P<0.05).结论 成功构建HIF-1α基因慢病毒载体pLVX-HIF-1α-IRES-ZsGreen1,该慢病毒载体可以介导HIF-1α基因在BMSCs中稳定表达,并提高BMSCs增殖能力.