整合素α4半胱氨酸突变质粒的构建及谷胱甘肽化水平检测

摘要

目的:旨在构建整合素α4半胱氨酸突变质粒,并初步鉴定α4的谷胱甘肽化修饰位点。方法:利用点突变技术将整合素α4的半胱氨酸残基分别突变为天冬氨酸残基,以免疫共沉淀的方法利用anti-Flag琼脂糖珠富积突变的α4蛋白,采用体外谷胱甘肽化的方法检测突变α4的谷胱甘肽化水平。结果:构建了α4的81、85、278、717、767、828位的半胱氨酸单突变质粒,体外谷胱甘肽化检测表明这些单突变的α4仍具有谷胱甘肽化修饰。结论:成功构建了整合素α4所有的未形成二硫键的半胱氨酸突变的真核表达质粒,初步判定α4可能具有多个位点半胱氨酸残基同时被谷胱甘肽化修饰。