腺病毒介导人类内皮型一氧化氮合酶基因在人离体血管内皮细胞中的表达

摘要

为探讨腺病毒介导的人类内皮型一氧化氮合酶（eNOS）基因在血管内皮细胞中表达和生成NO情况，制备重组腺病毒AdCMVceNOS，体外转染原代培养血管内皮细胞，于第1、3、5、7天应用免疫细胞化学法和硝酸还原酶法测定eNOS基因表达和钙依赖性NO生成情况。结果显示：①AdCMVceNOS感染细胞后1天即有阳性细胞表达，3天达高峰。胞质内弥漫的褐色颗粒，表明AdCMVceNOS病毒能在血管内皮细胞内合成大量的eNOS；②Ad-eNOS组NO生成量，在第1天已较两个对照组显著升高（F=66．14，P〈0．05），第3～5天达对照组50倍左右。结论：①腺病毒对血管内皮细胞有较高亲和性，可高效介导人类eNOS基因的表达；②重组腺病毒AdCMVceNOS体外转染培养的血管内皮细胞，转基因表达发生于24h内，并于第3～5天达高峰；③转基因产物eNOS的生成，可使内源性NO的产量升高到对照组的50倍左右。本研究结果为基因治疗肺动脉高压提供了实验依据。