桂枝去桂加茯苓白术汤含药血清对TGF-β_(1)诱导的人肾小管上皮细胞EMT的抑制作用及其机制

摘要

目的观察桂枝去桂加茯苓白术汤含药血清对TGF-β_(1)诱导的人肾小管上皮细胞上皮—间充质转化(EMT)的影响,并探讨其作用机制。方法取雄性SD大鼠40只,随机分为低剂量组、中剂量组、高剂量组和空白对照组各10只,其中低剂量组、中剂量组、高剂量组分别给予桂枝去桂加茯苓白术汤5、10、20 g/(kg·d)灌胃,空白对照组给予等体积生理盐水灌胃,连续7 d。腹主动脉采血,取上清。将HK-2细胞分为5组,空白对照组加入空白对照组大鼠血清;TGF-β_(1)组加入5 ng/mLTGF-β_(1);低浓度含药血清干预组先加入低剂量组大鼠含药血清后,再加入5 ng/mLTGF-β_(1);中浓度含药血清干预组先加入中剂量组大鼠含药血清后,再加入5 ng/mLTGF-β_(1);高浓度含药血清干预组先加入高剂量组大鼠含药血清后,再加入5 ng/mLTGF-β_(1);各组均培养48 h。采用Westernblotting法检测各组细胞EMT标志蛋白E-cadherin、α-SMA、Vimintin蛋白表达,MAPK信号通路相关蛋白ERK1/2、p38、JNK及其磷酸化水平,Smad3信号通路中Smad3及p-Smad3蛋白表达。结果与空白对照组比较,TGF-β_(1)组α-SMA、Vimintin蛋白表达升高,E-cadherin蛋白表达降低(P<0.05或<0.01);与TGF-β_(1)组比较,低浓度含药血清干预组E-cadherin及α-SMA蛋白表达差异无统计学意义;中浓度及高浓度含药血清干预组α-SMA、Vimintin蛋白水平降低,E-cadherin蛋白表达升高(P<0.05或<0.01)。与空白对照组比较,TGF-β_(1)组ERK1/2、JNK、P38、Smad3蛋白磷酸化水平均升高(P均<0.05);与TGF-β_(1)组比较,低浓度含药血清干预组p38蛋白磷酸化水平降低,中浓度含药血清干预组JNK、p38、Smad3蛋白磷酸化水平降低,高浓度含药血清干预组ERK1/2、JNK、p38、Smad3蛋白磷酸化水平均降低(P<0.05或<0.01)。结论桂枝去桂加茯苓白术汤能够抑制TGF-β_(1)诱导的HK-2细胞EMT过程,其作用机制可能与抑制TGF-β_(1)/Smad3、TGF-β_(1)/MAPK信号通路的激活有关。