miR322-5p干扰对小鼠Sca-1+心脏内皮祖细胞凋亡及分化的影响

摘要

目的 探讨miR322-5p干扰对小鼠Sca-1+心脏内皮祖细胞凋亡及分化的影响.方法 采用流式细胞分选仪分选小鼠CD45-Sca-1+CD31+与CD45-Sca-1+CD31-心脏内皮祖细胞,利用RNA干扰技术(RNAi)慢病毒转染,修饰miR322-5p基因在小鼠Sca-1+心脏内皮祖细胞中的表达,real-time PCR检测miR322-5p基因在小鼠Sca-1+心脏内皮祖细胞中的RNA表达,流式分析miR322-5p干扰后小鼠Sca-1+心脏内皮祖细胞的凋亡情况,免疫荧光观察miR322-5p干扰后小鼠Sca-1+心脏内皮祖细胞向心肌细胞、平滑肌细胞以及血管内皮细胞的分化情况.结果 CD45-Sca-1+CD31+、CD45-Sca-1+CD31-细胞占总细胞的比例分别为(3.53±0.47)％、(0.61±0.11)％,两者相比P<0.01;miR322-5p在CD45-Sca-1+CD31+、CD45-Sca-1+CD31-细胞中的相对表达量分别为1.00±0.03、0.04±0.00,两者相比P<0.01;慢病毒转染后,在miR322-5p基因敲低的CD45-Sca-1+CD31+细胞中,miR322-5p相对表达量为0.09±0.02;在miR322-5p基因过表达的CD45-Sca-1+CD31-细胞中,miR322-5p相对表达量为19.33±4.52.CD45-Sca-1+CD31+细胞凋亡率为0.760±0.114,miR322-5p基因被敲低的CD45-Sca-1+CD31+细胞凋亡率为0.556±0.116,两者相比P<0.05.CD45-Sca-1+CD31-细胞凋亡率为0.830±0.013,miR322-5P基因过表达的CD45-Sca-1+CD31-细胞凋亡率为0.903±0.017,两者相比P<0.05.miR322-5p基因被敲低后,CD45-Sca-1+CD31+细胞分化为血管内皮细胞的能力增强.miR322-5p基因过表达后,CD45-Sca-1+CD31-分化为心肌细胞的能力增强,分化为血管内皮细胞的能力降低.结论 miR322-5P基因可能是控制CD45-Sca-1+CD31+与CD45-Sca-1+CD31-心脏内皮祖细胞凋亡与分化的一个关键因子.