整合素连接激酶在缺氧晶状体上皮细胞中的表达变化及其对细胞上皮-间充质转化的影响

摘要

目的 观察整合素连接激酶(ILK)在缺氧晶状体上皮细胞(HLECs)中的表达变化及其对细胞上皮-间充质转化(EMT)的影响.方法 体外培养HLEC-B3,以不同浓度CoCl2培养液进行干预,CCK-8法筛选最佳的CoCl2作用浓度.以100μmol/L的CoCl2作用于HLECs建立缺氧模型,分别于缺氧0、6、12、24、48 h时以Western blotting法检测HLECs中的ILK.将HLECs分为CoCl2组、ILK抑制剂组、对照组,其中CoCl2组和ILK抑制剂组加入100μmol/L的CoCl2制作缺氧模型,ILK抑制剂组用ILK特异性抑制剂QLT0267(10 nmol/L)预处理1 h,对照组常规培养.三组继续培养24 h后采用Western blotting法检测细胞中的α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和纤维连接蛋白(FN),采用实时荧光定量PCR法检测α-SMA、FN mRNA.结果 缺氧6、12、24、48 h时ILK蛋白相对表达量均增高,其中缺氧12、24 h时ILK蛋白相对表达量高于缺氧6、48 h时(P均<0.05).CoCl2组细胞中α-SMA、FN蛋白相对表达量高于对照组,ILK抑制剂组细胞中α-SMA、FN蛋白相对表达量低于CoCl2组(P均<0.01).CoCl2组细胞中α-SMA、FN mRNA相对表达量高于对照组,ILK抑制剂组细胞中α-SMA、FN mRNA相对表达量低于CoCl2组(P均<0.01).结论 CoCl2诱导的缺氧HLECs中ILK表达增高;抑制ILK表达后,HLECs中EMT标志蛋白表达下调,EMT过程受到抑制.