人硫氧还蛋白基因分子克隆及真核表达载体的构建

摘要

目的 克隆人硫氧还蛋白(hTRX)cDNA序列并进行真核表达载体的构建.方法 应用RT-PCR技术,以胎肝组织细胞总RNA为模板,扩增出hTRX成熟蛋白的cDNA基因,并克隆至pUCm-T载体中;经PCR和测序鉴定正确后,再构建重组真核表达载体pcDNA3.0-hTRX,采用PCR、双酶切和基因测序鉴定.结果 将所得序列与GenBank (J04026)提供的序列比较,其酶活性中心(Trp-Cys-Gly-Pro-Cys)和基序与已知序列一致;PCR、酶切及测序鉴定表明真核表达载体构建正确.结论 成功克隆编码hTRX 成熟蛋白的cDNA基因,并构建其真核表达载体pcDNA3.0-hTRX.