MMP-2靶向RNAi质粒的构建及其对小鼠巨噬细胞MMP-2表达的沉默作用

摘要

目的 构建基质金属蛋白酶2(MMP-2)靶向的RNA干扰(RNAi)质粒,观察其对小鼠巨噬细胞MMP-2基因表达的沉默作用.方法 设计能转录小发卡结构RNA的DNA 序列,并与psiSTRIKETM质粒载体连接,构建受控于人RNA聚合酶Ⅲ启动子U6 的真核表达质粒psiSTRIKETM-MMP-2;将此质粒导入小鼠巨噬细胞内,采用RT-PCR、Western blot和免疫荧光技术检测小鼠巨噬细胞中的MMP-2 mRNA 及蛋白表达.结果 重组质粒psiSTRIKETM-MMP-2 用限制性PstⅠ内切酶酶切后,琼脂糖凝胶电泳中可清楚地看到重组载体被切为2个片断,证明重组质粒构建成功.将其转染小鼠巨噬细胞后,MMP-2 mRNA及蛋白表达下调.结论 成功构建了MMP-2靶向RNAi质粒,其能明显抑制小鼠巨噬细胞MMP-2 mRNA及蛋白的表达.