KLF4基因沉默大鼠肝星状细胞中Smad2、3、7mRNA及蛋白表达观察

摘要

目的 观察Kruppel样因子4(KLF4)基因沉默对大鼠肝星状细胞HSC-T6中Smad 2、3、7 mRNA及蛋白表达的影响.方法 设计并构建针对大鼠KLF4基因的3个干扰质粒(pGPU6-1、pGPU6-2、pGPU6-3),将质粒转染HSC-T6细胞,检测KLF4mRNA及蛋白,筛选出沉默效果最好的重组质粒用于后续实验.将HSC-T6细胞分为A、B、C、D组,A组常规培养细胞;B组在培养液中加入TGF-β1 50 ng/mL;C组转染重组质粒pGPU6-3;D组转染干扰质粒pGPU6-3 24 h后,再加入TGF-β1 50 ng/mL.采用real-time PCR法检测各组细胞中的Smad2、Smad3、Smad7 mRNA.采用Western blotting法检测各组细胞中的Smad2、Smad3、Smad7蛋白和磷酸化Smad2、3(p-Smad2、3)蛋白.结果 B、D组细胞中Smad2、Smad3、Smad7 mRNA相对表达量高于A组,C组细胞中Smad7 mRNA相对表达量高于A组(P均＜0.05).C组、D组细胞中p-Smad2、p-Smad3蛋白相对表达量低于A组,Smad7蛋白相对表达量高于A组(P均＜0.05).B组细胞中Smad2、p-Smad2、Smad3、p-Smad3、Smad7蛋白相对表达量均高于A组(P均＜0.05).结论 KLF4基因沉默后,HSC-T6细胞(包括被TGF-β1激活的HSC-T6)中p-Smad2、p-Smad3蛋白表达下调,Smad7 mRNA及蛋白表达上调;抑制KLF4基因表达可能有抗纤维化作用,作用机制与抑制TGF-β1/Smad信号通路激活有关.