长链非编码RNACCAT1对人宫颈癌细胞株HeLa增殖的影响及其机制

摘要

目的 观察长链非编码RNA (LncRNA)CCAT1对宫颈癌细胞株HeLa增殖的影响,并探讨其可能作用机制.方法 ①过表达、抑制CCAT1表达对HeLa增殖的影响:取对数生长期HeLa细胞分为1、2、3、4组,分别转染pcDNA3.1-CCAT1过表达慢病毒、pcDNA3.1对照慢病毒、siRNA、CCAT1-siRNA,别于转染0、24、48 h时采用 CCK8法观察各组细胞增殖情况.②HeLa细胞CCAT1互补microRNA分子分析:采用核质分离实验分析CCAT1的细胞定位,网站预测并分析与CCAT1互补配对的microRNA分子.③LncRNA CCAT1靶向microRNA分子分析:取HeLa细胞分为A、B、C组,分别转染乱序无意义序列、CCAT1-siRNA、pcDNA3.1-CCAT1过表达的慢病毒.转染48 h采用荧光定量PCR方法检测各组细胞miR-181a-5p、miR-181b-5p、miR-4295、miR-130a-5p、miR-148b-3p、miR-543 .④细胞RASSF1A 、cyclin D1 mRNA检测:取HeLa细胞,分为甲、乙、丙、丁、戊组,分别转染乱序无意义序列、CCAT1-siRNA、CCAT1-siRNA+ miR-181a-5p inhibitor(miR-181a-5p抑制剂)、pcDNA3.1-CCAT1过表达的慢病毒、pcDNA3.1-CCAT1过表达的慢病毒+ miR-181a-5p mimic(miR-181a-5p类似物).转染48 h采用荧光定量PCR法检测各组细胞RASSF1A 、cyclin D1 的RNA表达.结果 转染24、48 h时,1组细胞增殖OD值小于2组,3组细胞增殖OD值高于4组(P均<0.05).与CCAT1互补的前6位microRNA分别为miR-181a-5p、miR-181b-5p、miR-4295、miR-130a-5p、miR-148b-3p、miR-543.转染48 h时B组miR-181a-5p、miR-181b-5p、miR-4295、miR-130a-5p相对表达量均高于A、C组,C组miR-181a-5p、miR-181b-5p、miR-4295相对表达量均低于A组(P均<0.05).转染48 h时,乙组RASSF1A相对表达量低于、cyclin D1 mRNA相对表达量高于甲组,丁组RASSF1A相对表达量高于、cyclin D1 mRNA相对表达量低于甲组(P均<0.05);丙、丁、戊组RASSF1A相对表达量高于、cyclin D1 mRNA相对表达量低于乙组(P均<0.05);丁组RASSF1A相对表达量高于、cyclin D1 mRNA相对表达量低于丙组(P均<0.05);戊组RASSF1A相对表达量低于、cyclin D1 mRNA相对表达量高于丁组(P均<0.05).结论 CCAT1可抑制HeLa细胞的增殖.其机制可能为CCAT1上调RASSF1A表达、抑制cyclin D1转录.CCAT1通过与miR-181a-5p互补配对调控RASSF1A、cyclin D1的表达.