淫羊藿苷与透明质酸结合物的制备及其对膝关节软骨缺损兔软骨组织的保护作用

摘要

目的 制备淫羊藿苷与透明质酸的结合物,并观察其对膝关节软骨缺损兔软骨组织的保护作用.方法 利用甘氨酸氨基保护反应,将淫羊藿苷转化为氨基淫羊藿苷,利用其氨基与透明质酸的羧基进行偶联结合(摩尔比1:10),得到淫羊藿苷与透明质酸结合物.将24只右侧膝关节软骨缺损兔随机分为空白对照组、透明质酸钠组、淫羊藿苷组、结合物组,各6只.模型制备后第3周,空白对照组、透明质酸钠组、淫羊藿苷组、结合物组右侧膝关节腔内分别注射0.2 mL生理盐水、1%透明质酸钠注射液、淫羊藿含药血清冻干粉溶液及淫羊藿苷与透明质酸结合物;1次/周,共5周.各组分别于术后第4、8、12周采用空气栓塞法各处死2只,切开膝关节,观察膝关节大体形态并进行ICRS评分.各组术后第12周取股骨内髁软骨缺损修复区域,HE染色后进行组织学评分,采用抗原-抗体特异性反应检测软骨组织Ⅱ型胶原阳性表达率.结果 术后第12周,空白对照组膝关节软骨表面的缺损区外形修复不完全,表面不平,股骨内髁关节软骨面不完整,可见软骨下骨暴露.结合物组膝关节软骨表面缺损区外形基本完全修复,关节软骨表面较光滑,呈乳白色,关节内未见明显粘连.淫羊藿苷组和透明质酸钠组膝关节软骨面修复接近完整,但关节软骨表面不平.结合物组术后4周膝关节ICRS评分高于空白对照组及淫羊藿苷组,术后8、12周均高于空白对照组、淫羊藿苷组、透明质酸钠组(P均<0.05).透明质酸钠组、淫羊藿苷组、结合物组HE染色组织学评分均低于空白对照组,结合物组HE染色组织学评分低于透明质酸钠组、淫羊藿苷组(P<0.05或<0.01).空白对照组、透明质酸钠组、淫羊藿苷组、结合物组软骨组织Ⅱ型胶原阳性表达率依次升高,组间两两比较差异均有统计学意义(P<0.05或<0.01).结论 成功制备了淫羊藿苷与透明质酸结合物;该结合物可提高膝关节软骨缺损兔软骨组织Ⅱ型胶原表达并发挥软骨保护作用.