表没食子儿茶素没食子酸酯对乙肝病毒复制的体外抑制作用及其机制

摘要

目的 观察表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对乙肝病毒复制的体外抑制作用,并探讨其机制.方法 取对数生长期HepG2.2.15细胞,分为A、B、C组.A组、B组分别加入终浓度为40和80 μmol/L的EGCG,对照组不作任何处理.培养24h收集细胞上清,检测各组乙肝病毒e抗原和s抗原,采用real-time PCR法检测各组乙肝病毒DNA.取对数生长期HepG2.2.15细胞,接种于6 cm培养皿,将细胞分为1、2、3、4组.1、2组分别加入终浓度为40和80 μmol/L的EGCG,3组加入200 nmol/L的Rapamycin,4组不做任何处理,培养24h.采用Westernblotting法检测各组细胞自噬标记蛋白LC3-Ⅱ/Ⅰ、自噬降解相关蛋白p62/β-actin.取对数生长期HepG2.2.15细胞接种于12孔板,将细胞分为空白组、对照组、自噬抑制组(又分为3-MA组和CQ组).其中,对照组、3-MA组、CQ组又各自分为2组.对照组分别加入终浓度为40和80 μmol/L的EGCG处理.3-MA组和CQ组分别先用终浓度为10 mmol/L的3-MA和50 μmol/L的CQ预处理半小时,再分别加入终浓度为40和80 μmol/L的EGCG.空白组不作任何处理.24h后收集各组细胞上清,检测各组乙肝病毒e抗原、s抗原和乙肝病毒DNA.结果 与C组比较,培养24h时A、B组乙肝病毒e抗原、s抗原相对量及均乙肝病毒DNA的相对表达量降低(P均＜0.01).与4组比较,1、2、3组LC3-Ⅱ/Ⅰ均升高,p62/β-actin均降低(P均＜0.01).与对照组同浓度比较,1、2组乙肝病毒e抗原、s抗原相对量及DNA相对表达量均升高(P均＜0.05).结论 EGCG可体外抑制乙肝病毒的复制,其机制可.能为激活细胞自噬.