苏云金芽孢杆菌cry基因芯片检测方法的研究

摘要

建立了一种不经PCR扩增而直接应用寡核苷酸芯片从苏云金芽孢杆菌总DNA中检测cry基因的方法.对探针长度、浓度、总DNA含量、标记方法以及灵敏度等条件进行了研究.结果表明,用高浓度Klenow酶随机标记高浓度的总DNA与寡核苷酸探针(40～50 mer、40 μmol·L-1)杂交可用于检测Bt菌株中含有的cry基因;不同长度探针之间对杂交信号的影响存在显著性差异(P＜0.01),而不同浓度的探针之间没有显著性差异.此方法的其它条件为杂交温度4 2℃、时间3 h;检测的样品总DNA的灵敏度约为2.5 μg;标记产物杂交用量(0.625～20μg)的对数值与信号值的对数值之间存在明显的线性关系(r2=0.985～0.989).