细胞内转录拯救Asia1型口蹄疫病毒

摘要

[目的]建立口蹄疫病毒(FMDV)感染性分子克隆的体内拯救技术平台,为深入研究该病毒基因组的结构与功能奠定基础. [方法]将置于T7启动子下的FMDV Asial/JS/China/2005株全长cDNA的真核重组质粒pFMDV-A经Not Ⅰ线化后和表达T7 RNA聚合酶的真核质粒pcDNAT7P共转染BFIK-21细胞,进行病毒体内拯救的研究.[结果]转染细胞盲传第3代48 h后出现致细胞病变(CPE),第4代10 h出现典型的CPE.RT-PCR、间接免疫荧光、电镜等均检测到了拯救的FMDV,而且存在分子标签,表明构建的FMDV全长cDNA分子克隆在BHK-21细胞内成功包装出FMDV.拯救毒与亲本毒对乳鼠的致病力(LD50)差异不显著,具有相似的生物学特征.共转染试验重复多次,均拯救到FMDV病毒.[结论]成功建立了基于质粒为基础的FMDV的体内拯救方法.