基于COI序列的DNA微条形码技术鉴别熟肉制品中11种肉掺假的研究

摘要

建立并优化了基于COI序列的DNA微条形码技术(mini-barcoding)检测熟肉制品中11种常见肉类掺假的方法.样品经超声与真空冷冻干燥处理,提取DNA模板和PCR扩增后,目标扩增物经切胶纯化后进行克隆测序,并将测序结果提交GenBank数据库Blast比对.筛选出适合猪、牛、羊、鸡、鸭、鸽子、马、驴、鹅、兔、鼠11种肉类的扩增的通用引物COI-A,对PCR扩增条件进行优化,并建立18个掺假模式,对低经济价值肉类(猪、鸡、鸭、马、驴、鼠)的掺入的最低比例进行考察.结果表明:11种熟肉的DNA经通用引物COI-A扩增后,其扩增效率均为100％,18个掺假模式中,牛肉和羊肉中掺入6种低经济价值肉类的最低检出比例为5％,而掺入鸡肉的最低检出比例为10％,而鹅肉、鸽子肉和兔肉的掺假模式中最低检出比例为10％;利用本方法检测30批次市售样品,发现有18批次的熟肉制品存在掺假情况.该方法前处理简单,灵敏度合适,重现性好,可作为高经济价值熟肉制品中掺假低经济价值肉类的有效检测方法.