猪小肠粘膜碱性磷酸酶的分离纯化及性质研究

摘要

猪小肠粘膜经过Tris-HCl缓冲液(pH8.5)充分溶解、正丁醇除脂、冷冻离心、真空冻干等步骤处理后,先后经过Phenyl High Performance疏水层析/DEAE Fast Flow阴离子层析/Sephacryl S-200凝胶层析纯化后得到猪小肠粘膜ALP(碱性磷酸酶),并对其蛋白二级结构及理化性质进行研究.结果 表明:该酶经过十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分离得到ALP蛋白带,分子量约为57.0 kDa.该酶纯化倍数为68.2,比活力倍数为19.1 U/mg.利用圆二色性光谱测定纯化后蛋白二级结构,发现α-螺旋3.6％、β-折叠41.8％、β-转角21.5％、无规则卷曲33.1％.ALP在催化底物对硝基苯磷酸二钠(p-NPP)作用下最佳温度30℃、最佳pH为9.5;金属离子对ALP起到激活的离子为Mg2和Ca2,起到抑制的离子为Zn2和EDTA.