N-糖酰胺酶PNGase H+最小糖结构作用底物的研究

摘要

为探究N-糖酰胺酶的最小糖结构作用底物,以丹磺酰氯标记的复杂型七糖糖肽标准品为初始底物,运用酶法合成的方法来获得目标底物,分别使用β-N-乙酰氨基己糖苷酶、α--甘露糖苷酶、β-甘露糖苷酶和β-半乳糖基转移酶,制备出五种不同糖结构的糖肽底物,将制备的目标底物应用于N-糖酰胺酶PNGase H+最小糖结构作用底物的研究中.通过高效液相色谱检测PNGase H+对这5种糖肽底物的酶解效果.结果 表明,得到五种不同结构的糖肽底物,Dabsyl-Gly-Glu-Ash-(GlcNAc2Man3)-Arg、Dabsyl-Gly-Glu-Asn-(GlcNAc2 Man)-Arg、Dabsyl-Gly-Glu-Asn-(GlcNAc2)-Arg、Dabsyl-Gly-Glu-Ash-(GlcNAc)-Arg及Dabsyl-Gly-Glu-Asn-(GIcNAc2Gal)-Arg,浓度分别为8.3、7.0、6.5、4.5、6.5 pmol/μL.N-糖酰胺酶PNGase H+能够作用糖单元数为二、三和五的糖肽底物,而对含有单个N-乙酰葡糖胺的糖肽几乎没有作用,进而推断PNGase H+的最小糖结构作用底物为带有N-乙酰壳二糖的糖肽.