超高效液相色谱-高分辨质谱定量检测蜂毒衍生品中蜂毒肽的含量

摘要

蜂毒肽是从蜂毒中分离纯化出的一种多肽物质,占蜂毒干重的50％以上,是蜂毒发挥药理活性的主要物质.准确定量蜂毒衍生产品中蜂毒肽的含量对保证产品功效具有重要的现实意义.本文基于超高效液相色谱-高分辨质谱结合同位素内标法开发了蜂毒衍生品中蜂毒肽的准确定量分析方法,并开展了系统的方法学验证.样本经胰蛋白酶酶切后,过固相萃取小柱净化,然后经C18色谱分离,在ESI正离子模式下采用平行反应检测(PRM)进行检测分析.蜂毒肽的母离子为m/z 756.46343([M+2H]2+,VLTTGLPALISWIK),定量离子为m/z 927.56409;同位素肽段母离子为m/z 761.47835([M+2H]2+VLTTGLPALISWIKb),定量离子为m/z 935.604.该方法对蜂毒肽的检出限(LOD)和定量限(LOQ)分别为1.0μg/kg和3.0μg/kg,线性范围是3.0～500.0μg/kg,在低、中、高3个浓度的添加回收率范围为89.45％～113.23％,日内与日间变异系数均<11.33％.结果表明,该方法的灵敏度、准确性与精密度显著优于未酶切直接检测蜂毒肽的定量方法,可作为蜂毒肽衍生品中蜂毒肽含量的测定方法.