猪纤维蛋白原样蛋白1的克隆表达与生物信息学分析

摘要

cqvip:为了研究猪纤维蛋白原样蛋白1(FGL1)在免疫抑制性猪病发病机制中的作用,并为相关研究积累材料,提取猪肝脏组织总RNA,采用RT-PCR扩增猪FGL1基因,利用相关生物信息学软件分析猪FGL1的基本理化性质、亲-疏水性、信号肽、磷酸化位点、跨膜结构、二级和三级结构及其潜在的B细胞表位等,并进一步将目的基因插入pcDNA3.1/V5-HisB构建重组载体,转染293T细胞进行真核表达,然后采用Western blot和IFA对表达的目的蛋白进行鉴定。结果显示,猪FGL1基因长951bp,与牛FGL1序列同源性最高(91.4%),与原鸡FGL1序列同源性最低(67.0%);猪FGL1由316个氨基酸组成,理论等电点6.16,为亲水性的非跨膜稳定蛋白;有25个磷酸化位点,氨基端25个氨基酸组成其信号肽;其二级结构主要由α螺旋、延伸链、β转角及无规则卷曲组成;在其第82-309个氨基酸残基之间存在纤维蛋白原相关结构域;Western blot和IFA结果均显示,目的蛋白在转染的293T细胞中获得表达,并具有良好的反应原性。研究结果可以为猪FGL1的相关研究提供参考。