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火鸡疱疹病毒 SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PC R 检测方法的建立及应用

     

摘要

The purpose of this study was to develop a real‐time PCR assay to detect and quantify herpesvir‐us of turkey(HVT)in vivo and in vitro targeting the unique sorf 1 gene of the virus .This assay was carried out using a LingtCycler instrument and the product was monitored constinuously with the fluorescent double‐stranded DNA binding dye SYBR Green Ⅰ .The duplicate character of wild HVT and recombinant HVT‐pmpD‐N(rHVT‐pmpD‐N)was detected using this method .Standard curve was established and the correlation index was 0 .99 .The result showed that SYBR Green Ⅰ real‐time PCR had a minimum detec‐tion limit of 7 × 101 copies/μL which was 10 times higher in sensitivity than standard PCR .SYBR Green Ⅰreal‐time PCR assay also showed a similar replication rate between wild HVT and rHVT‐pmpD‐N .It was concluded that this could be an effective ,economic and reliable method for rapid detection of wild HVT and recombinant HVT .%针对火鸡疱疹病毒(HVT )特异性的 sorf 1区基因序列设计引物,建立检测 HVT 的SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR方法,并对其特异性、敏感性和重复性试验验证。结果表明,建立的实时荧光定量 PC R方法标准曲线的循环阈值(C t )与模版拷贝数呈良好线性关系(r2=0.99),熔解曲线分析显示该PC R扩增具有良好的特异性、敏感性和重复性,试验表明该方法最低检测浓度为7×101拷贝/μL。利用该方法对野生型 HVT和rHVT‐pmpD‐N在体内和体外的复制特性检测,结果表明重组后的HVT与野生型HVT的增殖速度基本一致。本试验建立的检测方法能够快速检测 HV T ,准确率高,特异性好,具有较高的灵敏度和稳定性,为监测HV T体内和体外的病毒含量和复制情况提供了一种有效的手段。

著录项

  • 来源
    《动物医学进展》|2015年第2期|16-20|共5页
  • 作者单位

    北京市农林科学院畜牧兽医研究所;

    畜禽疾病防控技术北京市重点实验室;

    北京100097;

    中国农业大学动物医学院;

    北京100193;

    北京市农林科学院畜牧兽医研究所;

    畜禽疾病防控技术北京市重点实验室;

    北京100097;

    北京市农林科学院畜牧兽医研究所;

    畜禽疾病防控技术北京市重点实验室;

    北京100097;

    北京市农林科学院畜牧兽医研究所;

    畜禽疾病防控技术北京市重点实验室;

    北京100097;

    北京市农林科学院畜牧兽医研究所;

    畜禽疾病防控技术北京市重点实验室;

    北京100097;

    中国农业大学动物医学院;

    北京100193;

    北京市农林科学院畜牧兽医研究所;

    畜禽疾病防控技术北京市重点实验室;

    北京100097;

  • 原文格式 PDF
  • 正文语种 chi
  • 中图分类 基因工程的应用;
  • 关键词

    火鸡疱疹病毒; SYBR GreenⅠ; 实时荧光定量PCR; sorf 1;

  • 入库时间 2022-08-18 11:06:53

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