以家蚕核型多角体病毒为载体高效表达天花粉蛋白基因

摘要

本文报道以家蚕核型多角体病毒为载体，在家蚕体内高效表达天花粉蛋白基因的结果。天花粉蛋白基因是用ＰＣＲ技术从栝楼基因组中分离的，该基因被插入到家蚕核型多角体病毒转移载体质粒ｐＢｍ—１的多角体蛋白基因启动子下游，构建成重组质粒ｐＢｍＴＣＳ。将重组质粒ＤＮＡ和野生型ＢｍＮＰＶＤＮＡ共转染家蚕培养细胞，通过在家蚕培养细胞中进行同源重组和筛选，获得了无多角体的重组病毒ＢｍＴＣＳ。采用ＰＣＲ技术对重组病毒进行了鉴定，证实重组病毒合天花粉蛋白基因。重组病毒对家蚕的感染性不及野生病毒，提示表达产物对病毒的增殖有抑制作用。对重组病毒感染的家蚕血淋巴进行了ＳＤＳ—ＰＡＧＥ和免疫印迹分析，结果显示在蚕体血淋巴中的表达产物天花粉蛋白占总蛋白的５％。本实验为利用基因工程方法大量生产天花粉蛋白提供了又一条新的途径。