甲醇酵母Pichia pastoris高水平表达有活性的辣根过氧化物酶

摘要

表达有活性的辣根过氧化物酶（ＨＲＰ） 不仅可以深入揭示ＨＲＰ 结构与功能及其生理作用规律， 而且为ＨＲＰ的广泛需要提供新的来源． 为了在甲醇酵母Ｐ． ｐａｓｔｏｒｉｓ 中成功表达， 将编码ＨＲＰＣ成熟肽的ｃＤＮＡ 构建到ｐＰＩＣ９ 上， 再转化到Ｐ． ｐａｓｔｏｒｉｓ 中， 筛选到了分泌表达非糖基化ＨＲＰ 和高糖基化ＨＲＰ（ 分子质量超过１００ ｋｕ） 两种主要产物的重组细胞株． 优化表达条件， 目标产物在摇瓶发酵液中高效表达， 可达４～６ ｇ／Ｌ． 并且直接从发酵液中可获得具有活性的高糖基化ＨＲＰ， 每毫升发酵液中酶活力约有２ Ｕ， 经初步的纯化ＨＲＰ具有最大吸收峰４０３ ｎｍ ．