LAMP实时浊度法快速检测大肠杆菌方法的建立与优化研究

摘要

根据大肠杆菌的特异性基因(malB),设计与筛查环介导等温扩增(LAMP)的引物,通过对甜菜碱用量、环引物的浓度、反应温度、dNTPs用量等反应条件的优化,得到较佳的LAMP反应体系,建立了LAMP实时浊度法快速检测大肠杆菌;在较优条件下,先后对9株非大肠杆菌菌株进行特异性检测和5株大肠杆菌的进行同源性检测.此外,结合课题组自行研制的多通道浊度仪,对LAMP扩增产物进行实时浊度监测.结果表明:LAMP实时浊度法检测大肠杆菌的灵敏度达16.010 ng/L,与实时荧光定量PCR的检测限相当.因此,建立与优化LAMP实时浊度法可为食品中大肠杆菌的现场快速检测提供了有力手段.