半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)双链RNA依赖的蛋白激酶R(PKR)基因克隆和实时定量表达分析

摘要

采用RACE方法克隆了半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)PKR基因(CsPKR),获得了CsPKR全长cDNA序列为2907bp,其中包含1959bp的开放阅读框,100bp的5'非编码区和848bp的3'非编码区.保守结构域分析显示推导的CsPKR氨基酸在N端存在两个特异的dsRBD(dsRNA binding domain dsRBD)结构域,在C端具有多个保守的激酶活性位点,包括ATP结合位点和底物配体结合位点,以及活性环结构A-loop.系统进化树分析显示鱼类、两栖类、鸟类及哺乳类的PKR具有共同的进化起源,CsPKR与牙鲆PKR的亲缘关系最为密切.荧光定量PCR结果显示,CsPKR基因在健康鱼多个组织中广泛表达,在脑中的表达最高,头肾中表达最低.经鳗弧菌和淋巴囊肿病毒分别感染后,CsPKR基因在免疫相关组织中呈现上调表达趋势,其中感染鳗弧菌12h后在血液中表达量较对照组上升了9.28倍,在感染淋巴囊肿病毒24h后,在肝脏中的表达达到最大,为对照组的9.97倍.以上结果暗示CsPKR基因在半滑舌鳎响应细菌和病毒免疫应答中起重要作用.