草鱼补体C3基因的克隆及在感染大中华鳋草鱼个体的表达分析

摘要

利用抑制差减杂交技术,构建了草鱼与大中华鳋感染相关的差减文库,测序得到一些免疫相关基因,其中包含与鲤补体C3高度同源的片段.根据此片段设计引物,采用RACE(rapidamplification of cDNA ends)技术,克隆了草鱼补体C3的cDNA,其全长5171 bp,编码1677个氨基酸.与已报道的补体C3一样,草鱼补体C3同样具有在功能上比较重要的残基以及保守的硫酯区.草鱼补体C3与高等脊椎动物鸡、小鼠以及人的C3在氨基酸序列上有着相近的相同率(37.9%～39.1%),与其他鱼类的比较显示与鲤的相同率最高,与鲤的3个基因型C3-H1,C3-H2,C3-S的相同率分别为80.5%,75.4%,79.2%.系统发育树也显示了草鱼补体C3与鲤补体C3,尤其是鲤C3-S基因型形成一簇.Southern杂交显示草鱼补体C3存在多个拷贝;虚拟Northern杂交和RT-PCR进一步证实所克隆到的补体C3在感染大中华鳋的草鱼中表达量增加,表明草鱼补体C3是一个与大中华鳋感染相关的基因.